厉害了！Word兽医检测技术！

兽医检测技术主要包括临床检查、病理剖检、实验室检查、特殊检查等方法。兽医检测的意义在于详细而全面地检查动物，阐明动物临床表现的病理生理基础，确定疾病的性质和类别，并提出可行的治疗方案。

兽医临床诊断的基本检查方法是问、视、触、叩、听、嗅，跟人医相似，而又有所不同。

问诊，即是向动物主人询问动物的基本情况，如品种、病史、发病时间等，初步了解发病动物的状况。

视诊，即利用视觉观察动物全身及局部状况，了解动物整体的体征以及局部的变化情况。

触诊，用手通过触、摸、按、压等方式了解动物体表及脏器的物理特征。

叩诊，是指用手或仪器叩击某表部位，使之振动产生声音，根据振动和声音的特点来判断被检查部位的状态是否异常。

听诊，用耳或听诊器来探听动物体内发出的心音、呼吸声等。可根据声音的特性与变化来判断相关脏器是否产生病变。

嗅诊，用鼻子来感受病畜各地方发出的气味，从而判断病畜的患病情况。一般来说皮肤、粘膜、呼吸道、胃肠道、呕吐物、排泄物、分泌物、脓液和血液等气味，根据其疾病不同，其特点和性质也有所不同。

此外还可以应用X光和B超等方法作为诊断的依据。X光可用来投射动物器官及骨骼形成影象，用来判断动物的内部器官或是骨骼有无病变。而B超可以清晰地显示各脏器及周围器官的各种断面像，由于图像富于实体感，接近于解剖的真实结构，可用于诊断动物的患病原因。

根据临床检查的需要，很多时候需要把病死动物进行解剖检查（可疑炭疽病死动物禁止剖检）。通过解剖检查病死动物的病变器官、组织，很多时候可以发现典型的病理症状。一般来说，进行病理解剖需要兽医拥有丰富的经验，才能够准确地作出判断，进而采取适当的措施进行疫病控制，减少养殖损失。

大多数的动物疾病都有不同程度的特殊病理剖检变化，对于疾病诊断上来说，具有重要价值，如鸡新城疫、猪瘟、伪狂犬、口蹄疫等。但有些病例的病理变化不太典型，对于非典型病理，需多剖检一些病例进行综合分析。

根据不同疾病的种类，寄生虫病可以采取剖检、虫卵镜检、涂片检查等技术；细菌病可以采取染色镜检、分离纯化、分型判定、实验动物检验等技术；病毒病可采取病毒分离、抗体中和等技术。

1.病料涂片镜检

通常在有显著病变的不同组织器官和不同部位进行涂抹制作多个涂片，然后通过染色进行镜检。涂片镜检可以鉴定具有特征性形态的病原微生物，但是对于大多数动物传染病来说，只能提供进一步检查的依据或参考。

2.分离培养和鉴定

用人工培养方法把病原体从病料中分离出来，再进行形态学、培养特性、动物接种、免疫学试验等方法作出鉴定。

3.动物接种试验

通常选择对该病原体最敏感的动物进行人工感染试验。在培养出病原体后，人工接种到易感实验动物身上，根据感染动物的症状、病理变化等特点来帮助诊断。在感染动物死后，进行病理剖检，采取病料进行涂片检查和分离鉴定。

根据不同疾病的特点，需要采用不同的诊断技术才能准确判定，而每一个诊断技术根据实际应用又可以继续细分。下面介绍较为重要的几个血清学诊断技术。

1.酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）

ELISA是现在兽医检测技术中最常用的实验室检测技术之一，具有灵敏性高、特异性强等优点，而且检测快速、操作简便、载体易于标准化，检测成本较低，在小的实验室就可以应用。除了在疾病诊断中外，在生命科学各领域中都得到广泛应用。

ELISA的基本原理是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行。具体应用可细分为直接法ELISA、间接法ELISA、夹心法ELISA、竞争法ELISA等。

通过应用ELISA可以迅速判断动物样品中是否含有相关的抗原或抗体，从而得出是否患有相关疾病的结论。

2.聚合酶链式反应（PCR）与反转录聚合酶链反应（RT-PCR）

PCR是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制。PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加，因此，可以通过在动物样品中分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，通过跟病原体基因组进行纵横对比，可以判断动物是否带有某种病原体，从而知道动物是否患病，甚至可以判断病原体是否发生变异。

RT-PCR则是将RNA的反转录（RT）与PCR相结合，首先使用逆转录酶将RNA模板转化成互补DNA（cDNA），然后将该cDNA利用PCR进行指数扩增的模板。

PCR具备特异性强、灵敏性高、简便、快速、纯度要求低等优点，广泛应用在各个生命科学领域上，其用途包含了检测基因突变、基因重组等，甚至可用于刑侦、亲子关系鉴定、物种亲缘远近的判断等。无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。

3.免疫荧光技术（IF）

免疫荧光技术是基于抗原抗体结合反应原理，将不影响抗原抗体活性的荧光色素标志在抗原或抗体上，使其与相应的抗原或抗体结合，然后在荧光显微镜上呈现出一种可观察的荧光反应。

免疫荧光技术的优点是特异性强、敏感性高、速度快。而缺点是非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序相对复杂。

4.原位核酸杂交技术

原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放射性或非放射性的外源核酸（即探针）与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，再经过一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。

5.沉淀试验与凝集试验

沉淀试验是指可溶性抗原与相应抗体结合，在适当量电解质存在下，形成肉眼可见的白色沉淀。而凝集试验的原理是颗粒性抗原与相应抗体结合后，在有适量电解质存在的情况下，抗原颗粒可相互凝集成肉眼可见的凝集块。

通过沉淀试验和凝集试验，可以用已知抗体来检测未知抗原，也可用已知抗原来检测动物体内的抗体水平。

6.补体结合反应（CFT）

可溶性抗原，如蛋白质、多糖、类脂、病毒等或者颗粒性抗原，与相应抗体结合后，其抗原抗体复合物可以结合补体，但这一反应肉眼不能觉察。如再加入红细胞和溶血素，即可根据是否出现溶血反应来判定反应系统中是否存在相对应的抗原和抗体。而这一反应即为补体结合反应。

补体结合反应可以被用于检测任一特定的存在抗体或特定抗原在患病动物的血清。它被广泛用于诊断感染。但在临床诊断实验室中，它被ELISA、PCR等技术所取代。

7.病毒中和试验

病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力。将病毒与已知抗体在适当的条件下混合、孵育，接种给敏感宿主，同时设立对照组直接接种病毒。若对照组动物出现病变，而实验组动物没事，则证明该病毒为该已知抗体所对应的病毒。

病毒中和试验需要使用活的宿主系统，病毒对宿主系统产生作用需要一定时间，所以需要时间较长。

8.血凝试验（HA）与血凝抑制试验（HI）

病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种现象成为凝血反应。而当病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒或病毒血凝素，则红细胞表面受体就不能与病毒或病毒血凝素直接接触，红细胞凝集现象就会被抑制，这种现象成为血凝抑制反应。

假设某未知病毒悬液能够凝集红细胞，给未知病毒悬液加入已知抗病毒血清，如果病毒的血凝现象受到抑制，证明该病毒是已知抗病毒血清所对应的病毒。

文丨王章权

摘自《动物防疫一线》2017年第6期