新进展丨猪流感病毒疫苗研究概况

猪流感（Swine influenza, SI）是一种急性、高度接触性传染病，至今仍在全球范围内不断流行。该病在在临床上多表现为突发性咳嗽、高热、嗜睡、厌食、流鼻液、呼吸困难和体重下降等症状，具有发病率高而死亡率低的特征。

近年来，猪流感在我国各地发病较为常见，且对不同年龄段的猪只均可造成不同程度的侵害，尤其是体重较大的育肥猪在流行季节发病率可高达100%，但死亡率仅4%左右。该病主要严重影响猪的生长发育，导致猪的肉料比明显降低，种猪一旦患病可影响其生产性能，给养猪场带来巨大的经济损失。

猪流感的病原—猪流感病毒（Swine influenza virus,  SIV）是一种球状结构的单股负链RNA病毒，隶属正粘病毒科，流感病毒属。其病毒粒子具有包含HA（血凝素）、NA（神经氨酸酶）和M2等蛋白的囊膜结构，囊膜内部为核衣壳结构，其中包含核蛋白NP、核蛋白复合物RNP以及PA、PB1、 PB2多聚酶蛋白。猪流感病毒的基因组由八个独立的RNA片段组成，依次为PB2、 PB1、PA、HA、NP、NA、NS和M。

我国针对猪流感病毒的病原学和血清学监测己经进行了十余年，且多种亚型（如H1N1、H1N2、H3N1、H3N2和H2N3亚型等）都己被检测出来，而H1N1、H1N2和 H3N2 亚型是当前猪流感的主要流行毒株，其中A型流感病毒H1N1亚型对猪的感染流行最为广泛。

SIV因其毒株多样、感染途径繁杂，且无特效治疗药，因此很难达到理想的预防和治疗效果，目前，临床上主要采取接种疫苗的方式来实现对该病的预防。

在欧洲和美洲，以H1N1、H3N2或H1N2猪流感病毒为基础的灭活全病毒佐剂疫苗，是目前市场上可以购买到的主要猪流感商业疫苗。

为了克服疫苗免疫时母源抗体的干扰，激发动物机体最广泛的免疫反应，人类从未停止对疫苗新品或新型疫苗的研究。目前，多种SIV新型疫苗研制己初步获得成功并且通过了实验室测试，但真正投入市场仍需时日。

一、灭活疫苗

迄今，灭活疫苗是应用最广泛且技术最成熟的猪流感疫苗，主要是油佐剂乳化的全病毒灭活疫苗，有单价苗和双价苗。接种猪流感全病毒灭活疫苗后，它能刺激猪只机体产生特异性HA抗体。HA抗体能阻断流感病毒与宿主细胞上的唾液酸受体结合，从而阻止病毒的入侵，在免疫保护中发挥重要作用。目前，市售的SIV灭活疫苗主要通过鸡胚和细胞培养生产得到，疫苗制作过程中，既要求疫苗候选株能在鸡胚中高水平繁殖，同时要求其具有良好的免疫原性。为了与猪流感流行株的抗原性和遗传系谱尽可能保持一致，每个地区都会根据当地流行情况，筛选田间株用于疫苗生产。猪流感全病毒灭活疫苗接种途径一般是猪只颈部肌肉。初次免疫后的猪只，隔2～4周再行加强免疫1次。针对母猪，首选的免疫方法是，在配种前，每季度或者分娩前3～6周，对初产母猪免疫2次。当母猪体内SIV的抗体滴度比较高时，无论是由于接种疫苗刺激产生，还是由于感染SIV导致的，为了避免母源抗体的干扰，仔猪的SIV疫苗免疫应当推迟到12～16周龄。

二、重组蛋白疫苗

已有多次报道，小鼠接种M2和NP蛋白后，能抵抗强致病性的流感病毒的感染。

这些发现为通用流感疫苗的研究奠定了基础和提供了研究方向。最近，Loeffen等已构建出一种可溶性的重组HA三聚体（来源于A/California/04/2009的HA）。因为HA三聚体更接近自然条件下的HA蛋白，而且能够诱导动物机体产生更高滴度的中和抗体，所以作为疫苗候选抗原，HA三聚体应该比HA单体更有优势。用这HA三聚体2次肌肉注射免疫猪群，免疫3周后经滴鼻接种2009 pH1N1病毒进行攻毒保护实验。结果发现，免疫接种后的猪只体内HA中和抗体滴度达到较高水平。产生的抗体不仅能够抵抗2009 pH1N1病毒，而且能够抵抗类欧亚类禽、猪流感H1N1病毒的感染，不过不能抵抗H1N2病毒。HA三聚体几乎能够完全阻断病毒在呼吸道上的复制及向外界排毒。

三、载体疫苗

虽然载体疫苗可能无法刺激动物机体产生显著的效应T淋巴细胞（cytotoxic Tlymphocytes，CTL）反应，但是将流感病毒的某些基因重组到病毒载体后，所表达出的流感病毒重组蛋白能够安全地诱导体液免疫和细胞免疫应答。人腺病毒5型（hAd5）载体己经被用于表达H3N2型SIV（sw/Texas/98）的HA基因。小鼠免疫重组载体疫苗（hAd5/ HA）后，只能部分抵抗A/Hong Kong/1/68 (H3N2) 。随后，又构建了hAd5与sw/Texas/98（H3N2）的NP基因重组载体疫苗，用此重组载体疫苗肌肉注射免疫猪只一次，在免疫后的第28d，就能检测到高滴度的病毒特异性NP抗体。滴鼻接种与sw/Texas/98（H3N2）高度相似的H3N2病毒后，免疫组猪群能完全抵抗病毒攻击，未发现向外排毒和脏器病变。

四、DNA疫苗

DNA疫苗是一种通过基因工程技术改造的裸DNA质粒，在转染细胞中能产生特定抗原进而激发宿主免疫应答的疫苗。细胞内的抗原能被I型和II型MHC分子识别，从而刺激机体产生相应的体液免疫和细胞免疫，包括细胞毒性T细胞为主体介导的特异杀伤细胞反应（CTL反应）。这个稳定的DNA质粒能够比较容易地进行大规模生产，且成本低。目前，己经研制出针对人流感病毒和禽流感病毒的DNA疫苗，实验证明它们在雪貂、马、小鼠、鸡以及非灵长类动物体内能诱发强大的免疫反应。

不过，关于DNA疫苗的使用，也存在一些争议。有些专家学者认为：这些DNA疫苗有可能会整合到宿主的基因上，增加恶性肿瘤的风险，并且会诱导机体产生自身抗体来抵抗DNA疫苗从而导致自身免疫性疾病。所以研究更有效、更安全的DNA疫苗将是科学技术以及兽医临床用药的一个重大挑战。

五、基于猪流感M2e蛋白流感疫苗

目前也有很多关于M2e蛋白高度保守的报道，并且己经报道出一些基于M2e基因的“通用疫苗’。但是研究发现，M2e本身只有24个氨基酸，其自身的免疫原性较低，所以常常靠增加其拷贝数或融合一些疫苗佐剂来增强疫苗的免疫效果。试验证实，多分子拷贝数的M2e免疫原性明显增强。

目前以流感病毒M2e基因为抗原靶标的高效疫苗仍处于试验开发阶段，随着研究的不断深入，相信不久以后，以M2e为靶标的流感疫苗将实现对不同亚型流感病毒的免疫保护作用，有望降低猪群流感病毒的感染几率。