猪瘟抗体如何检测才更准确

猪瘟抗体如何检测才更准确

猪瘟在我国属重大动物疫病。我国对猪瘟防控主要采用猪瘟疫苗免疫的策略，而抗体检测是免疫效果评价的主要手段。目前，世界动物卫生组织推荐的猪瘟抗体检测方法是ELISA 检测方法和荧光抗体中和试验，而荧光抗体中和试验对试验条件和操作人员的要求很高，且耗时长，仅适合专业实验室进行少量样本检测，不宜推广应用。因此可以说，ELISA方法是目前国际上承认的惟一适合大规模应用的猪瘟抗体检测方法。

在进行ELISA检测方法评价时，最重要的两个指标就是敏感性和特异性，而二者又存在一定的矛盾性。当对一种检测方法的敏感性要求较高时，势必会损失一部分特异性；同样，当特异性要求较高时，势必会损失一部分敏感性。因此，对于一个好的检测方法来说，一定要寻找敏感性和特异性最佳的平衡点和结合点。目前，用于猪瘟抗体检测的ELISA方法主要有阻断ELISA和间接ELISA两种原理。阻断ELISA使用了单克隆抗体，因此检测的特异性更高；而间接ELISA则更侧重于敏感性。

阻断ELISA 和间接ELISA 在实际应用过程中，均具有合理性。但是针对我国的大规模猪瘟强制免疫现状，如何在不同的应用范围选择适合的试剂盒就成为一个重要问题。 因此，本文主要介绍间接ELISA试剂盒和进口阻断ELISA试剂盒在临床应用上的对比研究，帮助读者在实际生产中选择更为合适的检测试剂。

试剂盒研制原理的差异

阻断试剂盒基于液相阻断原理，反应孔的颜色深浅与血清中的抗体含量成反比。阻断ELISA采用了单克隆抗体检测，可大大提高检测的特异性，但实际检测的对象却只是针对单一表位的抗体（检测为特异性抗体）。因此，当阳性血清中针对该表位抗体丰度不高时，会导致检测的敏感性降低（出现假阴性结果）。  

间接试剂盒基于间接ELISA 原理，反应孔颜色深浅与结合在反应板中的特异性抗体的量成正比。由于间接ELISA检测的是针对包被抗原蛋白的多克隆抗体（检测为猪体内的总抗体），因此会提高检测的敏感性。

两种试剂盒与荧光抗体病毒中和试验符合率分析

荧光抗体病毒中和试验（FVNT）是OIE 推荐方法，为猪瘟抗体检测的“金标准”。有临床试验表明对两种ELISA抗体检测试剂盒检测结果存在差异的283 份血清样本采用FVNT的方法进行了确认检测，结果显示，间接试剂盒与FVNT 的符合率为69.26%，阻断试剂盒与FVNT 的符合率为28.62%。不符合样本的确认结果表明，间接试剂盒能更真实地反映疫苗免疫后的中和抗体水平，而阻断试剂盒对阳性血清存在明显的漏检状况。

对免疫猪血清抗体的动态监测

通过对免疫猪抗体增长趋势的检测结果看出，猪瘟抗体间接ELISA对抗体由阴转阳的检出时间为免疫后的12-15d，而阻断ELISA试剂盒检测表明在免疫后的15-28d陆续由阴性转为阳性。由于间接ELISA 检测的是针对E2蛋白的所有抗体，而阻断ELISA检测的是针对E2蛋白某一个表位的抗体，在免疫初期由于抗体丰度的不同，导致间接ELISA对阳性抗体的检出要早于阻断ELISA。说明间接ELISA敏感性更高，更适合免疫后的早期监测，疫苗效力监测和免疫程序的制定。

对不同抗体水平的猪血清进行有效的区分

猪瘟抗体间接ELISA试剂盒可以对不同抗体水平的猪血清进行有效的区分，可以从IE值上直观的比较两份血清抗体水平的高低。间接法试剂盒中所采用的标准阳性血清为反复免疫的猪瘟抗体强阳性血清，而待检的免疫血清在免疫后213d达到最高值时，仍不到阳性对照血清OD值的80%。因此说明，间接ELISA试剂盒能够在更宽的范围内对抗体水平进行区分。而阻断ELISA试剂盒采用的是阻断ELISA原理，当抗体达到可以将包被的抗原全部封闭的水平后，就出现了检测平台期。因此，阻断ELISA只能在一定范围内对抗体水平的高低进行区分。

临床应用

在进行田间大规模普查时，需要对某一地区，某一群体的整体免疫状况进行分析，因此对检测方法的敏感性要求较高，间接ELISA更适合于我国猪场大规模猪瘟疫苗普免抗体水平的普查。针对种猪场猪瘟的净化，需要对每头动物的抗体水平进行检测评价的同时，还要排除其他疫病阳性抗体的干扰，因此对检测方法的特异性要求较高，荧光抗体病毒中和试验为金标准。在实际应用过程中，一定要对试剂盒的质量进行严格的甄选，并且根据实际应用对象选择适当的检测方法。

文中数据来源：国家猪瘟参考试验室；

稿件来源：南京天邦

摘自《动物防疫一线》2017年第6期