仔猪断奶应激对消化酶的影响

为减少仔猪对疾病的感染率，提高母猪生产力、猪的出栏率和栏舍利用率，14日龄超早期断奶技术已在国外得到应用。仔猪断奶后从吮食母乳转向采食理化性状、气味味道及营养价值不同的干饲料，由于其消化道酶系统未发育完全，不能适应这种食物的剧变产生应激反应，引起胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶等消化酶活性的降低 (Lindemann,1986;Owsley,1986;Cera,1990;Jensen,1997)，导致消化功能紊乱并出现腹泻。本试验旨在研究 14日龄超早期断奶应激对仔猪几种消化酶活性的影响，为超早期断奶仔猪饲料的配制提供理论依据。

1、材料与方法

1.1　试验动物与分组　试验选用两窝14日龄杜×(大×长)三元杂交商品猪，每窝10头，并将每窝仔猪按体重平均分为哺乳对照组和断奶处理组，每组两个重复(栏)，每栏5头猪。

1.2　试验饲粮　试骈饲粮配制参考国外研究报道及NRC(1988)营养标准，饲粮组成为：玉米34.68%、豆粕27.93%、乳清粉15%、葡萄糖10%、鱼粉5%、植物油4.43%、磷酸氢钙1.04%、石粉0.47%、赖氨酸0.27%、蛋氨酸0.18%、添加剂1.00%。饲粮营养指标为：消化能15MJ/kg、粗蛋白质20%、赖氨酸1.40%、蛋氨酸0.48%、苏氨酸0.89%、色氨酸0.28%、钙0.85%、有效磷0.50%。

1.3　译验方法

1.3.1　材料制备：分别于断奶后第0(14日龄)、2、4、6、9天早8：00从每栏内随机抽取一头猪，集中屠宰后立即结扎幽门瓣、回盲瓣、胰腺管，摘取胰脏，剥除脂肪组织和结缔组织;取空肠全段，收雂内容物并用玻璃棒搅拌均匀。全部样品置于-80℃冷冻保存。测定时称取解冻待测样品于研钵内，加10 倍体积0.001mol/L盐酸及少许石英砂，研磨吊置4℃冰箱1小时提取酶液，再用beckman AvantiTM30高速离心机于4℃条件下离心30分钟，离心力为18400r/min，取上清液用来测定胰蛋白酶、淀粉酶及脂肪酶活性。

1.3.2　消化酶活性测定：胰蛋白酶活性测定依据施韦尔特-竹中(Schwert & Takenaka)法，使用仪器为日本岛津UV-2201分光光度计。淀粉酶及脂肪酶的测定使用美国Johnson & Jonhson公司提供的Vitro 700干化学全自动分析仪，测定方法为干片法。

2、结果与讨论

2.1　胰蛋白酶活性

2.1.1　胰腺中胰蛋白酶活性：与哺乳仔猪相比，在断奶后9天内断奶仔猪胰腺中胰蛋白酶活性降低，其中在断奶后第2及第9天分别降低79% (P<0.01)和39%(P<0.05)，分别相当于断奶前本身(14日龄)的21%和61%，可见断奶应激对胰酶的合成有一定的影响，胰腺中胰蛋白酶活性在断奶后9天内不能完全恢复。此结果与其它学者有关断奶应激使胰腺中胰蛋白酶活性降低的报道相一致(Corring,1978;Lindemann,1986;Owsley,1986;Jensen,1997)。据Hartman(1961)报道，断奶仔猪需14天才能恢复与哺乳仔猪相同水平的酶活。推测可能是断奶应激对胰腺组织内胰蛋白酶合成的影响大于对其分泌的影响。由此可见，胰腺中胰蛋白酶活性与断奶应激密切相关。

2.1.2　空肠内容物中胰蛋白酶活性：在断奶后第2天，断奶仔猪空肠内容物胰蛋白酶活怣降低，由哺乳组的26.38U/mg蛋白下降为断奶组的13.25U/mg蛋白，下降了50%(P<0.05)，相当于断奶前本身的65%。此后即回升，随着采食量逐渐增加，至断奶后第4天，断奶仔猪空肠内容物中胰蛋白酶活性即达到哺乳仔猪水平，也恢复到断奶前本身的水平。此后则高于哺乳仔猪和断奶前本身的水平，至断奶后第9天，其活性则由哺乳组的 18.68U/mg升高为断奶组的59.48U/mg蛋白，升高了218%(P<0.05)，此时断奶仔猪空肠内容物胰蛋白酶活性也升至断奶前本身的290%。断奶仔猪空肠内容物胰蛋白酶活性随采食量的增加而逐渐达到并超过哺乳仔猪水平的现象表明，采食量的增加可刺激仔猪空肠内容物胰蛋白酶的合成。

2.2　淀粉酶活性：在断奶后9天内，断奶仔猪胰腺和空肠内容物淀粉酶活性均低于哺乳仔猪，这与Cera(1990)、 Hartman(1961)、Owsley(1986)等报道的仔猪断奶后淀粉酶活性降低的结果相同。随断奶后时间的推移，哺乳仔猪与断奶仔猪胰腺淀粉酶活性呈递增趋势，但断奶组低于哺乳组，其中，在断奶后第6和第9天分别降低50.8%和33.8%。两组仔猪空肠内容物淀粉酶活性在断奶后4天内均快速上升，且较为接近，表明断奶应激对淀粉酶活性的影响不大，断奶仔猪淀粉酶活性的增加可能是为了满足消化饲粮中淀粉的需要(Jensen,1997)。但在断奶后第6和第9天出现断奶仔猪空肠内容物淀粉酶活性大幅度下降现象，分别较哺乳仔猪下降71.8%(P<0.05)和68.5% (P<0.05)，可能是此时仔猪采食量增加，淀粉酶被增加的肠道内容物稀释所致。

2.3　脂肪酶活性　本试验中在断奶后9天内，断奶仔猪胰腺和空肠内容物脂肪酶活性均低于哺乳仔猪，Lindemann(1986)、 Cera(1990)也有断奶应激使脂肪酶活性降低的报道。本试验中随时间的推移，断奶仔猪胰腺脂肪酶活性不断下降，在断奶后第4天和第9天，分别较哺乳仔猪降低61%和57%(P<0.05)。断奶仔猪空肠内容物脂肪酶活性变化平稳，从第6天起开始升高，至第9天比断奶前增长了44%;哺乳仔猪空肠内容物脂肪酶活性一直在快速增长，至第9天比最初增长了20倍，两组仔猪空肠内容物脂肪酶活性差异在断奶后第4和第6天达显著水平，断奶组较哺乳组分别降低86%和65%(P<0.05)。脂肪的消化主要依赖于胰腺脂肪酶(Borgstrom,1993)和胃肠道脂肪酶(Newport and Howarth,1985),而试验中脂肪酶活性的降低，一方面是仔猪断奶日粮中脂肪含量低于母乳中脂肪含量，即脂肪酶活性的降低可能是其底物浓度降低所致。另外，由于胰腺内脂肪酶的分泌在断奶前较慢，而在断奶后很快增加(Pierzynowski et al.,1993)，这样本试验中脂肪酶活性的降低也可能是脂肪酶分泌速率大于合成速率，从而使脂肪酶耗竭所致(Efird et al.,1982)。

试验结果表明，断奶应激不同程度地降低了仔猪胰腺和空肠内容物中胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性。随着断奶后时间的推移和采食量的增加，断奶仔猪空肠内容物中胰蛋白酶、脂肪酶以及胰腺中淀粉酶活性得以恢复并呈上升趋势。