国外猪人工授精技术研究进展(2)

　　2.2  猪冷冻精液人工授精

　　在大型种公猪场使用冷冻精液人工授精，充分利用优秀种公猪的遗传潜力很有必要。然而，冷冻精液在世界范围内的人工授精中应用不到1%。冷冻解冻精液子宫颈内授精获得繁殖率低于冷藏精液，同时每次授精需要的大量精子，这就限制了冷冻精液在养猪业世界范围内的商业化应用。

　　目前，猪冻精人工授精一般每次采用50～60亿精子的大剂量子宫颈内授精，但受孕率与产仔率都很低，这可能与子宫颈内授精方式的低效有关。同时，冷冻－解冻精液品质下降，冷冻－解冻精子通过子宫颈褶,进入子宫到达子宫输卵管连接处更加困难，导致在输卵管峡部不能储存足够的精子。当然，使用冷冻－解冻精子与液态保存精子相比，胚胎透明带附着的精子数量大约少10倍左右，输精的精子数量前者比后者要多2倍。因此，冷冻－解冻精子的有效应用需要在授精方式上改进。

　　无论子宫颈后授精还是子宫深部授精都应该是改善冷冻－解冻精子受精产仔效果的比较适合的授精方式。这2种授精方式应能抵消冷冻－解冻精子在商业农场中常规应用的限制因素,即每次需要的大量精子和得到的低受精率。此外，这2种授精方式适合商业化应用，尤其是农户使用。在西班牙、澳大利亚和瑞典完成的不同的报告证明了这一点。

　　Bolarin等(2006)研究了自发排卵母猪（n=407），强调每次授精只使用10亿冷冻－解冻精子的效果。当接近排卵时间（超声波检查）时采取子宫深部授精，获得超过80%的产仔率和胎产仔数也超过10只。并强调重视发情排卵时间确定在更精确时间授精以得到最高受精率的重要性。此外，Wongtawan等(2006)建议使用冷冻－解冻精子子宫深部授精应该在自发排卵前4～8 h进行。

　　在人工授精方式中冷冻－解冻精子的受精成功率取决于人工授精的排卵的时间间隔。目前，预测排卵时间的方法受限于平均发情持续时间的评估，因为自发排卵在发情后发情期的3分之二时发生。因此，建议常规繁育管理的养猪户使用冻精授精时增加子宫深部授精每次剂量的冷冻－解冻精子数。
总之，子宫深部授精方式有使用最少10～20亿冷冻－解冻精子实现高受精率的潜力。

　　2.3 猪的性控精液人工授精

　　 通过流式细胞仪进行X、Y精子分离技术是基于DNA含量的相对差可以鉴别含X或Y染色体的精子，并且受精前确定后代的性别。精子由荧光染料(Hoechst 33342)染色，染料穿入精子头部细胞膜与DNA结合。因为Y染色体比较大的X染色体偏小并携带更少的DNA，精细胞在激光下曝光表现出2种不同的荧光强度并可通过流式细胞仪测量。目前，借助高速分离系统，每分钟能鉴别超过2万个精细胞，1 h内超过1500万精子能够被性别分离，超过85%的纯度。因此，每24 h能得到3.6亿性别分离的精子。

　　性控精子通过外科手术授精生产了第一只小猪。给126只母猪（n=126)子宫深部授精每次至少5000万精子，产仔率超过75%和胎仔数9只。Vazquez等(2003)报告激素处理46只经产母猪，一次授精最少5000到7000万新鲜性控精子，产仔率达到40%。但每次授精所需精子数量还是太大，以致不能认为子宫深部授精对性控精液是一种有效的授精方式。

　　 最近，研究显示最少1000万冷藏精子通过外科手术植入子宫输卵管结合部即可得到高的受孕率（89%）。虽然，手术卫生严格，但外科剖腹手术不被认为是养猪场母猪授精的实用方式，一种可选择的方法是腹腔镜法。比起剖腹手术把精液直接输入子宫，腹腔镜法是一种创伤较小的手术，并且可在大的养殖场培训推广。在意大利完成的一项近期试验，Fantinati等(2005)通过腹腔镜把精子输入接近子宫输卵管连接处，达到高受精率所需的冷藏精子数量可以减少至每个子宫角500万个精子。这种腹腔镜技术已经被证明可用于性控精液输精。最近报道，使用腹腔镜法每个子宫角最少30万个性别分离精子，受孕率可达到80%。此外，近来的研究也证明必须在排卵前输精才可获得最高的繁殖率，因为性别分离精子在雌性生殖道中的存活时间较短。

　　3 小结

　　大剂量新鲜或冷藏精液进行子宫颈内授精可以得到较高繁殖率。新的授精方式如子宫颈后、子宫深部和腹腔镜的发展，将会有助于提高冷藏或冷冻－解冻精子效率，并可使冻精应用成为可能，同时可推进性控精液人工授精的推广。使用适当的授精方式，母猪每次输精6亿个冷藏精子、10亿个冷冻－解冻精子或者60万个性别分离精子，都可能得到较高的繁殖率。此外，一些新的繁殖生物技术如精子为载体的转基因和精子胶囊的研究与推广都依赖于有效的输精方式。