猪的人工授精技术

　　猪的人工授精即利用器具或徒手将公猪精液采取，经一系列的处理再授精到发情母猪的子宫内，以达到受孕的目的，这一过程称为人工授精.

第一节 猪人工授精的发展和普及

　　一、简史

　　猪人工授精于1932年首次试验成功，到50年代世界各国广泛应用于生产。据估计目前全世界有1亿头以上的母猪实现了人工授精。受胎率一般在78-90%。但是在七十年代国外工厂化、集约化养猪业兴起，人工授精曾一度下降，自然交配重又兴旺。直到八十年代后期，由于人工授精技术的革新，精液保存技术的进步，人工授精用品的工业化生产，精液品质评定的先进仪器的发明和使用，使发情鉴定和防止传染病有了可*的手段，并以惊人的速度普及。据介绍，日本和我国台湾省猪的人工授精实施率在70-80%。

　　我国大陆1954年在广西桂县首先开展人工授精，到1956年全国推广猪人工授精，授精母猪数6145头，受胎率达62%，到目前为止大多数地方人工授精母猪数急剧下降，唯江苏省苏南地区开展统一供精和人工授精网络建设，坚持人工授精，据1998年农业部在广州畜牧工作会议上江苏省介绍，农村猪人工授精实施率达40%以上，一头公猪年配种1200余胎，最好的太仓县达2500余胎。

　　截止1998年春秋，广东省组织两批代表赴美国和欧洲考察猪人工授精，回来后，在几个大的集约化猪场试行人工授精。经一年的实践，其中“广三保”、“大岭山”、“塘厦”、“广州市良种猪场”等猪场均取得理想效果，人工授精情期妊娠率达90%以上，母猪分娩率达86%，获得美国推广专家Don Levis博士的赞扬。

二、集约化养猪人工授精飞速发展的原因

　　根据美国学者Levis的总结AI技术飞速发展的原因为：(1) 市场上要求优质的胴体；(2) 食品上要求上市的猪在体格大小，胴体品质变化差异很小（整齐划一的规格）；(3) 减少了公猪饲养头数；(4) 降低了饲养成本；减少了配种所需的劳动力；(5) 建立了廉价可*的精液供应体系；(6) 利用先进手段，可以快速准确地检查母猪发情；(7) 精液稀释液商品化效果好；(8) 实现了精液处理、贮存机械化、自动化；(9) 减少了疾病传播的机会；(10) 建立了人工授精网络、无论猪场规模大小，都可以实现人工授精；(11) 由于交通方便和精液贮存技术的进步，可以实现不受地域和时间的限制；(12) 可以实现优秀基因的迅速传播。总之人工授精具有：投资小，利润高，回收期短，见效快等优点。

　　猪人工授精是猪的繁殖技术上一项重大的革命，在其发展过程中充分显示了生命力。在人工授精技术上今天仍然处于初级阶段，今后随着腹腔内输卵管授精和卵巢卵泡内授精技术的改进和完善，必然在人工授精上发生更大的革命。科学技术和生产实践相结合，使生产企业获得利润是人工授精迅速发展的前提。

三、人工授精的优点

　　人工授精是一种有价值的猪育种技术。付出检查发情和对母猪输精的少量额外劳力，即可从AI中获得巨大利益。其优点主要为：

　　1 充分利用种公猪的优良基因；

　　2 引入猪的新品系时可防止各种疾病的传播；

　　3 可以使用计划的杂交方案来从杂种优势中获得最大利益，而不必维持两个或更多品种的大量公猪；

　　4 整个猪群可在母猪群成批配种、分娩、断奶和再配种的基础上进行管理，而不需要饲养大量公猪；

　　5 可以以相对低的费用购买高于平均性能并经检查质量和保存寿命的验证公猪精液。

　　成批配种具有另外的优点。通过分娩时窝间交*寄养有利于仔猪均匀。仔猪能够成群饲养，因而有利于成批测验和上市。成批生产有利于更好地控制疾病，因为整个的分娩、补饲间和肥育间可以被腾空，在饲养第一批猪之间可彻底消毒。

第二节 公猪的调教与采精

一、 公猪调教的方法

　　公猪性成熟后即可开始调教，由于各个品种不同，性成熟的年龄差异较大。外来品种7-8月龄性成熟，8-9月龄开始调教训练。国内品种4-6月龄性成熟，7-8月龄开始训练采精。调教方法有以下几种：

　　1 观摩法：将小公猪赶至待采精栏，让其旁观成年公猪交配或采精，激发小公猪性冲动，经旁观2-3次大公猪和母猪交配后，再让其试爬假台畜进行试采。

　　2 发情母猪引诱法：选择发情旺盛、发情明显的经产母猪，让新公猪爬跨，等新公猪阴茎伸出后用手握住螺旋阴茎头，有节奏地刺激阴茎螺旋体部可试采下精液。

　　3 外激素或类外激素喷洒假母台畜
用发情母猪的尿液，大公猪的精液，包皮冲洗液喷涂在假母台畜背部和后躯，引诱新公猪接近假台畜，让其爬跨假台畜。

二、 公猪的保健

　　1 合理的采精频度：青年公猪身体仍在继续发育，每周以采精一次为宜，一岁以上公猪每周采精2次，壮年公猪可二周五次采精。采精的频度主要依据每次射出精子总数和柯利用的精子为标准（即精液质量），以保证精液的可贮存性和最高的采精力。

　　2 最佳的环境：公猪舍环境要求终年凉爽，相对湿度在70-75%，温度在8-20℃之间。

　　3 公猪的营养：公猪营养应保证蛋白质、维生素和矿物质与微量元素的供应，营养指标除按美国NRC标准外，应根据精液的产量和质量调整。目前关于微量元素锌与硒对精子质量影响最，采用易吸收的螯合态微量元素添加剂，公猪精子外膜完整性和耐贮性可提高。

　　4 公猪管理：公猪栏面积约8-12m2,地面不能光滑。若栏舍太小，容易造成公猪四肢和睾丸摩擦碰撞墙壁或栏杆的突起物造成外伤。

三、 采精

　　采精前必须剪去包皮周围的长毛，防止细菌污染精液。
采精方法：采精方法分假阴道法和徒手法两种。徒手法由于不需要器械，方法简便，可分段收集精液，因此最近几年世界各国普遍流行。假阴道法是借助模仿母猪阴道功能的器具，只能采集全分精液，要求设备多，清洗费时费力，现在采用较少。

　　选手采精时，采精员戴上双层医用塑料手套，手套外面不得使用滑石粉，采精员蹲于公猪一侧，待公猪阴茎伸出后即用右手抓住阴茎，握住螺旋头，由轻到重有节奏地紧握**螺旋部，并以适度压力，使公猪射精。另一手持集精杯接取公猪精液。由于公猪的射精反应对压力比对湿度更为敏感，只要掌握适当的压力，经过训练的公猪都可以采到精液。近来，发现涂抹其它公猪的分泌物如尿液、唾液、精液对徒手采精的新公猪刺激更大，利用外激素喷洒在假母台畜上也可，但成本高。假台畜的制作应结实、稳定、高度可以调节，便于公猪爬跨。假台畜用钢木结构时，外面选盖一厚层弹性泡沫塑料，中间垫一层麻布，外用厚帆布或用剥制熟化后的猪皮更好。采精场地应平坦、开阔、干净、无噪声。在采精时用录放机播放公母猪自然交配时的“哼哼”声最佳。假台畜后面垫一块1.5米长，1.2米宽的弹性橡胶垫，可防滑，保护公猪四肢，又易用水冲洗消毒。采精时应固定人员，以免更换人员时，由于不良刺激导致采精失败。集精瓶，应在内部垫上一个塑料薄膜袋（可用保鲜膜代替），集精瓶应有600毫升容积，能保持37-38℃的双层套杯，中间充40-42℃温水即可保温，由于精子对温度（低温）十分敏感，防止精液突然降温引起不可逆的休克。采精后精液温度不得低于35℃。精液由窗口递给实验室人员，只要称量塑料薄膜袋内精液重量，可换算成体积、或直接记录精液重量。

　　训练公猪采精必须细心和有耐性，对待公猪态度要亲切、温和。采精场地外围应设有高1.2米相距约30厘米的铁柱防护栏，人可侧身穿过，公猪则不能越过，避免公猪狂躁时伤人。 采精时间和频度：采精应在早晨未饲喂空腹时采精。如已饲喂必须在喂后1小时采精。公猪射精时卧伏在假台畜上不动，前肢拥抱假台畜，不断发出“哼哼”声，肛门不断收缩，即为射精表现。公猪射精量为150-500毫升，大约总精子数560-1600亿。公猪射精时间约6-10分钟，出现2-4个射精波。第一次射精1-3分钟，射精量少约占5-10%。首先射出的10-20毫升精液中含微量尿液，细菌含量达1000万/毫升，精子数极少，pH值为8.4-9.0，此时不宜接取精液。第二次射精约为2-6分钟，射精量占总量的30-50%，乳白色含大量精子和胶状物质。第3-4次射精时间为3-8分钟，射精占总量的40-60%；最后射出稀薄如水的液体，精子含量很少，含大量胶体物质也不必接取。

　　影响公猪射精量和精液品质的因素很多，猪的品种、体格大小、体况等。据报导，大约克公猪，采精间隔1-3天射精量在150-300毫升，间隔3-4天为200-360毫升，间隔5天，均在200-500毫升之间。精子质量以间隔3天最好。采精频度依年龄、季节和精液品质决定。成年公猪最多可隔二日采精一次，1.5-4岁公猪每周采精2次。

第三节 精液品质检查

　　一、 精液品质检查的目的及步骤

　　精液品质检查的目的是：(1) 鉴定精液品质的优劣，确定精液是否可以利用；(2) 根据检查结果，了解公猪的营养水平和生殖器官的健康状况；(3) 了解公猪的饲养管理和繁殖管理对公猪的影响；(4) 反映采精技术水平和操作质量；(5) 依据检查结果，确定稀释倍数，保存和运输的预期效果；(6) 通过检查了解外界环境对公猪生殖力的影响，如高温的影响、空气和水源污染对公猪精液品质的影响等。精子是对外界环境最灵敏的指示剂。轻微的毒物、毒性对人和动物体的反映还不明显的时候，对精液品质早已有了显著的变化。生殖毒理学就是建立在研究重量毒物、毒性首先影响生殖细胞的理论基础上建立和发展起来的。

精液检查前的要求和处理步骤：

　　1 精液的初步处理：在采精的同时，集精瓶口复盖特制的滤精纸或纱布，流入了集精瓶的精液已滤去大块的胶状物。

　　2 精液的外观评定：外观评定可对精液作出初步的判断，并决定是否对精液进行下一步的检查。判定精液是否正常，先看颜色，如颜色为乳白色或灰白色属正常颜色，出现脏物如毛、血、尿、脓，说明精液污染或生殖道患炎症，应立即将精液废弃。检查气味，正常公猪精液具有一种特殊的腥味，但无臭味。精液有臭味或腐味均为异常精液。

　　3 称取重量或测量体积：将精液置粗天平上称重，然后将精液移入2000-3000毫升烧杯，称量集精瓶窝重，即得出精液重。观察混浊度是精子数量多少（密度大小）的标志。精液象棉絮一样混浊，并滚动如云，说明混浊度好，可用“+++”表示，中等者为稀，用“++”表示，稀薄不良用“+”表示。

　　4 等温第一次稀释：将精液置于35-36℃和稀释液相同湿度的水浴槽内，第一步以1:1稀释。在采精后5分钟内进行第一次稀释。因为精清中含有刺激精子活动及损害精子生存的物质，经第一次稀释后则可保护精子免受精清中有害物质的损伤。

　　5 迅速进行活力和密度评定。

　　6 缓慢降温的同时，进行稀释直到最终浓度。
降温的要求是从35℃-26℃，每3-4分钟降1℃，从26℃-16℃期间每4-5分钟降1℃，如需快速从25℃移到16℃控温水箱保存，应放在泡沫塑料保温盒中或贮精瓶外包裹毛巾数层，以达缓慢降温之目的。

　　7 精子的保护：在精液处理过程中小心保护、精心操作是十分重要的。否则精子活力迅速下降、受胎率降低。注意事项是：(1) 处理精液过程中要在无菌罩或超净工作台内进行，防止外界微生物侵入；(2) 避免精子所处环境过热过冷，防止湿度突然变化；(3) 杜绝精子和水或有毒、有害化学物质接触；(4) 避免阳光、日光灯直接照射，最好在蓝色光线下操作；(5) 减少精液和空气接触，分装入瓶中，最好灌至瓶颈，以减少接触空气面积，并可在其上层复盖一薄层液体石腊阻断空气更好。需长期保存的精液，上层充上氮气，效果更好。(6) 搅拌精液应缓慢、均匀，不可激烈搅拌或震动；(7) 实验室内严禁抽烟和使用挥发性有害液体（如苯、乙醚、汽油、香精等）。

二、 精液质量的仪器检查

　　显微镜检查：显微镜检查可以主观判断精子的活率（活动精子的百分率）、密度，正常形态率（或畸型率），通过染色在1500-1600倍光镜的油镜下也可检验顶体状况。
1 显微镜检查必需的设备和用具：相差显微镜（Phase Contrast Microcopy）、显微恒温板（仪）（37.0-38.0℃）和显微恒温仪等。

　　生物显微镜分学生型、生产应用型和研究型三大类型。人工授精室最好用“生产应用型”，因其功能适合精液检查与处理的要求，耐用价格较低。目前我国国产显微镜性能已进入先进国家行列，价格只有同类国外产品的60-70%。
2 平面、凹面载玻片和盖玻片。
3 取样的重量吸液器或白金耳（以棒代替）。
4 血球计数板和数字计数器以及擦镜纸。

三、 精子的活力检查与表示方法

　　精子活力表示方法有两种：一种是欧美习惯用法，由世界卫生组织（WHO）和国际动物繁殖学会推荐，日本和我国台湾也采用此法用0、+、++、+++、++++来表示，我国则沿用前苏联的方法，以0-9分表示。

　　按照欧美的表示方法是：取10-100微升原精液，置干净的载玻片上，用22平方毫米的盖玻片盖上，在400倍光镜下观察10个不同视野下必须有100个以的精子，分别记录活动的状况，以0-4级统计精子运动的速度和方向，活动力强弱，分别记录各级活动精子的百分率。

0、“0”精子无运动力，为死精子。

1、“+”精子运动较差，为颤动或摆动。

2、“++”精子运动尚可，可见向前运动，但速度很慢。

3、“+++”精子运动很好，向前运动较快。

4、“++++”精子运动极好，迅速向前运动。

　　精子运动力与受精力关系密切。在猪人工授精中原精活力低于国内目前习惯评定0.7级，相当于欧美以及日本和台湾“+++”，冷冻精液解冻后不低于3级（++），即目前习惯上的0.5级。

　　精子运动力测定在猪人工授精中尚缺规定统一的标准。在生殖生物学中规定人和实验动物的标准如下：

　　取原精液通过玻璃管脱脂棉，按12-20滴精液用50ml2.9%柠檬酸钠液或Locks溶液稀释。让混合液（标本）在方形小杯直至得到一条水平基线，标本以分光光度计在254nm吸光度下分析。当滴流停止，光密度（OD）减少，就测得全部精子的运动力。运动力以SMI表示。

　　SMI=（开始时的OD值-30秒时的OD值）/开始时的OD值
对每一样本作三次测定，求其均值。从生殖生物学研究证明，每一个体都有一个重复性很高（非常稳定）的SMI值，对于种猪而言，急迫需要研究各个体的SMI值及其与生殖力的关系。

　　WHO规定由以色列科学家发明的精子计数板为国际标准板。如果计算100万个精子，以时间计算检查射出的精液中，每100个精子穿过一个计算室孔（其容积为每边0.05毫米，深0.02毫米），则精子运动速度(V)按下式求出：

　　V=N/G.D.T.Cos45o

　　精子运动速度平均值N，精子通过孔（G）的数目，此即0.05*0.03=0.001平方毫米，精子密度（D）100个精子穿孔的时间（T）；Cos45o在公式中的作用是表明精子不全是垂直线通过的。如果N=100个精子，则公式计算如下：

　　V=140，00/（t）.(d)如果(T)以秒计数，精子密度(d*100万/ml)则V值等于每秒若干U。如猪射精精液密度为160*106个/毫升，那么100个精子通过（G）孔，需时间为：

　　V=140,000/(7*160)=125微米/秒

　　精子运动力是生殖力的重要的一项属性，没有高活性运动力的精子，其受精能力是非常低的。

　　四、用显微镜血球计数板测定密度的方法

　　用白血球稀释吸管吸取精液到0.5刻度（不得有气泡），然后吸取3%盐水至稀释管膨大部上方的11刻度线，以拇指及中指紧压吸管两端摇动混匀。

　　稀释精液滴入计数盘：将管末端的液体去掉数滴，再将稀释均匀的精液滴入盖上盖玻片的计数板边缘，让毛细现象渗入计数室内。

　　精子计数是按四端和中心计数5个中方格，或按对角线连续计数5个中方格。计数时以精子头部为准（即计上不计下，计左不计右）。

　　1ml内精子总数=5个中方格的精子数*5（整个计数室为25个中方格）*10（1立方毫米的精子数计数室高为0.1mm）*1000(1立方厘米=1000立方毫米)其中为1ml精液内精子数*200（稀释200倍）=*106个/毫升，将上式化简为：1ml内精子数=5个中方格精子数*100万。

　　五、精子的形态学检查

　　取精液标本一滴与10%福尔马林液相混合均匀，盖上盖玻片在相差显微镜400-640倍下观察。或者取10ml试管内伊红染液（1%浓度）1ml，加入精液0.2ml，置37℃水浴锅中恒温浸染20分钟，取一滴伊红染后的精液，再滴加一滴5%苯胺黑或苯胺兰混匀染色后抹片，用显微镜在640或800倍下观察，死精子染为红色，活精子不着色。每个抹片观察200个以上精子，得到活率。然后观察分类计数，正常头、大头、小头、梨形头、双头、双颈、双尾、无头、断尾、折尾、卷尾、颈和中段含有原生质滴以及稚形未成熟精子等。正常形态精子在鲜精中应不低于82%（畸形精子不超过18%），保存过精子正常形态的精子不低于80%（畸形不高于20%）。
 

来源：不详